Fotometria

 Fotometria

O terceiro capítulo é dedicado ao estudo da fotometria, um dos princípios fundamentais para a maioria das análises realizadas em bioquímica clínica. A fotometria ocupa-se da medição das grandezas relacionadas à emissão, recepção e absorção da luz, sendo a base para métodos que determinam a concentração de substâncias em solução a partir da quantidade de luz que estas absorvem.

Inicialmente, o texto introduz os conceitos básicos da radiação eletromagnética, situando a luz visível na faixa de comprimentos de onda entre 380 e 750 nanômetros (nm). Abaixo dessa faixa, encontra-se a radiação ultravioleta (UV), e acima, a infravermelha. A cor de uma solução é explicada pelo fenômeno da absorção seletiva: uma solução apresenta determinada coloração porque absorve todos os comprimentos de onda da luz branca incidente, exceto aquele correspondente à cor observada, que é transmitido. Assim, a cor de uma solução é complementar à luz que ela efetivamente absorve.

Dois conceitos operacionais centrais são definidos: a transmitância (T) , que é a fração da luz incidente que consegue atravessar a solução, e a absorvância (A) , que representa a capacidade da solução em absorver a luz. A absorvância é calculada como o logaritmo negativo da transmitância (

$A=-\log T$

As leis fundamentais que regem esta relação são apresentadas de forma integrada. A lei de Bouguer-Lambert estabelece que a absorção da luz é diretamente proporcional à espessura da solução atravessada (caminho óptico). A lei de Beer postula que a absorção é diretamente proporcional à concentração do soluto absorvente. A combinação dessas duas leis resulta na expressão fundamental da espectrofotometria: 

$A=a\cdot b\cdot c$

Na prática laboratorial, a aplicação quantitativa desta lei dispensa o cálculo direto da constante 'a'. Utiliza-se uma solução padrão de concentração conhecida, processada nas mesmas condições que a amostra teste (desconhecida). Medindo-se as absorvâncias de ambas, a concentração da amostra teste é calculada por uma regra de três simples: 

$C_t=(C_p\times A_t)\mathrm{/}{A}_p$

, assumindo que o caminho óptico (b) é o mesmo para ambas as cubetas. O capítulo ressalta que esta relação é válida apenas quando a reação analítica segue rigorosamente a lei de Beer.

O texto descreve, por fim, os componentes básicos de um fotômetro ou espectrofotômetro: uma fonte de luz (lâmpada), um monocromador (filtros, prismas ou redes de difração) para selecionar o comprimento de onda desejado, um compartimento para a cubeta que contém a solução, um detector (fotocélula) que converte a luz transmitida em sinal elétrico, e um dispositivo de leitura (galvanômetro) que apresenta o resultado em termos de transmitância ou absorvância. Um procedimento essencial é a calibração do instrumento com um "branco" (solução contendo todos os reagentes, exceto a substância de interesse), que permite zerar a absorvância, compensando a absorção do solvente e das paredes da cubeta e garantindo que a leitura da amostra reflita apenas a absorção do analito em questão.