Hibridização in situ Fluorescente (FISH) para Amplificações

 Hibridização in situ Fluorescente (FISH) para Amplificações

A hibridização in situ fluorescente (FISH) é uma técnica citogenética molecular amplamente utilizada para a detecção e localização de sequências específicas de DNA em cromossomos. Uma das aplicações mais relevantes do FISH é a identificação de amplificações gênicas, que desempenham um papel crucial no diagnóstico e prognóstico de diversas doenças genéticas e cânceres. Este artigo revisa os fundamentos teóricos da técnica FISH, sua metodologia específica para amplificações, aplicações clínicas e avanços recentes na área.

As amplificações gênicas referem-se ao aumento do número de cópias de uma determinada região do DNA dentro do genoma. Essas anomalias são frequentemente observadas em cânceres e podem levar à superexpressão de oncogenes, conferindo maior agressividade tumoral e resistência a tratamentos. A técnica FISH é amplamente utilizada para detectar essas amplificações de maneira rápida e precisa, auxiliando na escolha de terapias direcionadas e no monitoramento da resposta ao tratamento.

Fundamentação Teórica A técnica FISH baseia-se na hibridização de sondas de DNA ou RNA marcadas com fluorocromos a sequências complementares no genoma. No contexto das amplificações gênicas, são utilizadas sondas específicas que permitem a identificação do aumento no número de cópias de um gene-alvo. Entre as principais amplificações identificáveis por FISH, destacam-se:

• HER2 (ERBB2): Associado ao câncer de mama e gástrico, determinante para a indicação de terapias com trastuzumabe.

• MYC: Presente em diversos tumores, como linfoma de Burkitt e câncer de pulmão.

• EGFR: Relacionado ao câncer de pulmão de células não pequenas, impactando o uso de inibidores de tirosina quinase.

• CCND1 (Ciclina D1): Amplificação frequente no carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço.

• MDM2: Implicado em sarcomas, como lipossarcoma bem diferenciado e osteossarcoma.

Metodologia do Exame FISH para Amplificações A detecção de amplificações gênicas por FISH envolve as seguintes etapas:

• Preparação da amostra: O material biológico pode ser obtido de biópsias tumorais, sangue periférico ou amostras fixadas em parafina.

• Desnaturação e hibridização: O DNA da amostra é desnaturado para permitir a ligação específica das sondas FISH ao DNA-alvo.

• Uso de sondas específicas: Para amplificações, são empregadas sondas de número de cópias (copy number probes) ou de locus específico.

• Análise por microscopia de fluorescência: A avaliação da intensidade e quantidade de sinais fluorescentes permite determinar o grau de amplificação gênica.

Aplicações Clínicas da FISH para Amplificações A técnica FISH tem se mostrado essencial no diagnóstico e prognóstico de diversas neoplasias, incluindo:

• Câncer de mama e gástrico: A detecção da amplificação de HER2 orienta o tratamento com terapias-alvo.

• Câncer de pulmão: Amplificações de EGFR e MET influenciam a escolha de inibidores específicos.

• Tumores hematológicos: Amplificações de MYC são importantes no diagnóstico de linfomas agressivos.

• Sarcomas: A amplificação de MDM2 diferencia lipossarcomas bem diferenciados de outras neoplasias mesenquimais.

Avanços Recentes e Técnicas Complementares A evolução da citogenética molecular tem aprimorado a detecção de amplificações por FISH, com destaque para:

• FISH quantitativo: Análise digital de imagens para quantificação precisa da amplificação gênica.

• FISH em tecido parafinado (FFPE-FISH): Aplicação em amostras fixadas, permitindo diagnóstico retrospectivo.

• Combinação com NGS (Next-Generation Sequencing): Complementa a análise FISH, proporcionando um perfil molecular detalhado do tumor.

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 A técnica FISH para amplificações representa um avanço significativo na citogenética molecular, oferecendo um método rápido e preciso para a detecção de alterações gênicas associadas a diversas neoplasias. Com a contínua evolução da biotecnologia, espera-se que novas abordagens aumentem ainda mais a sensibilidade e aplicabilidade dessa ferramenta, promove