Validação de métodos quantitativos: precisão, exatidão e linearidade

 Validação de métodos quantitativos: precisão, exatidão e linearidade

A obtenção de resultados quantitativos confiáveis é um pilar fundamental para a tomada de decisões em diversos campos, desde a pesquisa científica e o controle de qualidade industrial até o diagnóstico clínico e o monitoramento ambiental. Para assegurar a validade desses resultados, é imprescindível que os métodos analíticos quantitativos sejam rigorosamente validados. A validação de um método quantitativo estabelece, por meio de evidências experimentais documentadas, que o método é adequado para o propósito pretendido, fornecendo resultados confiáveis dentro de limites especificados. Dentre os parâmetros de desempenho cruciais avaliados durante a validação, destacam-se a precisão, a exatidão e a linearidade.

A precisão de um método quantitativo refere-se ao grau de concordância entre resultados de ensaios independentes obtidos sob condições estipuladas. Em outras palavras, a precisão avalia a dispersão dos resultados em torno de um valor central. Ela pode ser expressa em termos de repetibilidade (precisão sob as mesmas condições operacionais em um curto intervalo de tempo, com o mesmo analista e equipamento) e reprodutibilidade (precisão entre laboratórios, analistas, equipamentos e em diferentes dias). A precisão é geralmente quantificada pelo desvio padrão (DP) ou pelo coeficiente de variação (CV), sendo que valores menores indicam maior precisão. Uma boa precisão é essencial para garantir a consistência dos resultados gerados pelo método.

A exatidão, por sua vez, define o grau de concordância entre o resultado obtido pelo método e um valor de referência aceito. Ela expressa a proximidade do resultado experimental com o valor verdadeiro ou esperado do analito. A exatidão é frequentemente avaliada pela determinação da recuperação de um analito adicionado a uma matriz amostral conhecida ou pela análise de materiais de referência certificados (MRCs). A recuperação é expressa como a porcentagem do analito adicionado que é efetivamente quantificada pelo método. Valores de recuperação próximos a 100% indicam boa exatidão. A exatidão garante que o método forneça resultados que sejam verdadeiramente representativos da concentração do analito na amostra.

A linearidade de um método quantitativo descreve a capacidade do método em obter resultados de teste que sejam diretamente proporcionais à concentração do analito dentro de uma determinada faixa. A linearidade é avaliada pela análise de uma série de padrões de concentração conhecida do analito, abrangendo a faixa de trabalho do método. Os dados obtidos são então plotados em um gráfico de resposta (sinal analítico) versus concentração, e a linearidade é avaliada visualmente e estatisticamente, geralmente pelo coeficiente de correlação (r) ou pelo coeficiente de determinação (r²). Um valor de r ou r² próximo a 1 indica uma boa linearidade. A linearidade é crucial para garantir que o método seja confiável para quantificar o analito em diferentes níveis de concentração dentro da faixa de trabalho estabelecida.

O processo de validação de um método quantitativo envolve a realização de experimentos planejados para avaliar esses e outros parâmetros de desempenho, como limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), seletividade/especificidade e robustez. A escolha dos parâmetros a serem avaliados e os critérios de aceitação para cada parâmetro dependem da finalidade do método e das diretrizes regulatórias aplicáveis.

Para avaliar a precisão, geralmente são realizadas múltiplas replicatas de uma amostra homogênea em condições de repetibilidade e, em alguns casos, em condições de reprodutibilidade. Os resultados obtidos são então utilizados para calcular o desvio padrão ou o coeficiente de variação. Para avaliar a exatidão, podem ser utilizados estudos de recuperação, onde uma quantidade conhecida do analito é adicionada a uma matriz amostral isenta do analito nativo, e a recuperação percentual é calculada. A análise de MRCs, quando disponíveis, também é uma excelente forma de avaliar a exatidão. A linearidade é avaliada pela construção de uma curva de calibração utilizando padrões de concentração conhecida e pela avaliação estatística da relação entre a resposta do analito e sua concentração.

A documentação completa de todo o processo de validação, incluindo os protocolos experimentais, os dados brutos, os cálculos, os resultados obtidos e a discussão sobre o atendimento aos critérios de aceitação, é essencial. Um relatório de validação bem elaborado fornece as evidências objetivas da qualidade e da confiabilidade do método quantitativo.

A validação de métodos quantitativos, com a avaliação rigorosa da precisão, exatidão e linearidade, é um componente indispensável para garantir a qualidade e a confiabilidade dos resultados analíticos. Esses parâmetros de desempenho fornecem informações cruciais sobre a consistência, a veracidade e a faixa de aplicabilidade do método, assegurando que os dados gerados sejam adequados para o propósito pretendido e contribuam para decisões informadas e seguras em diversas áreas. A implementação de práticas robustas de validação é, portanto, fundamental para a credibilidade e a excelência dos laboratórios.